Reacția în lanț a polimerazei (PCR) este una dintre cele mai cunoscute metode în laboratoarele de științe ale vieții.
Plăcile PCR sunt fabricate din plastic de primă clasă pentru o manipulare și analiza excelentă a probelor sau a rezultatelor colectate.
Au pereți subțiri, uniformi, care asigură un transfer precis de căldură.
În pregătirea pentru aplicarea în timp real, fracțiuni mici de ADN sau ARN sunt izolate și stocate în plăci PCR.
Plăcile PCR sunt foarte eficiente la termoetanșare și, de asemenea, limitează fluxul de căldură.
Cu toate acestea, deoarece plăcile PCR sunt eficiente și fiabile, ele sunt predispuse la erori și inexactități la procesarea probelor.
Deci, dacă sunteți interesat să obțineți plăci PCR de bună calitate. Cel mai bine este să contactați un producător de încredere de plăci PCR. Cu aceasta, poți fi sigur că vei obține cel mai bun preț.
Mai jos sunt câteva măsuri de precauție pentru a evita contaminarea reactivilor sau a probelor și pentru a preveni rezultatele inexacte.
Dezinfectați mediul
Rezultatele incorecte pozitive sau negative din cauza prezenței impurităților vă pot face să vă îndoiți de rezultate.
Impuritățile și contaminanții vin sub diferite forme, cum ar fi ADN-ul neînrudit sau aditivi chimici, care reduc în cele din urmă eficiența și eficacitatea reacției.
Există multe modalități de a reduce considerabil rata de contaminare a plăcilor PCR.
Utilizarea vârfurilor de filtru sterilizate este o altă modalitate utilă de a preveni intrarea impurităților în probă prin pipetă.
Un set complet curat de echipamente, inclusiv pipete și suporturi, este furnizat special pentru utilizarea PCR. Acest lucru va garanta un transfer neglijabil de impurități sau contaminanți în jurul laboratorului.
Utilizați înălbitor, etanol pe pipete, suporturi și bănci pentru a șterge contaminarea.
Alocați spațiu rezervat pentru toate reacțiile PCR pentru a reduce și mai mult contaminarea cu particule.
Folosiți mănuși curate la fiecare pas și schimbați-le frecvent.
placă PCR
Verificați concentrația și puritatea șablonului.
Curățenia bancilor și a echipamentelor utilizate pentru analiza probelor folosind PCR trebuie menținută. Este esențial să se verifice puritatea probelor înainte de analiză și procesare.
De obicei, analizorul ia în considerare concentrația și nivelul de puritate al probei de ADN.
Raportul de absorbție de 260 nm/280 nm nu trebuie să fie mai mic de 1,8. Impuritățile au fost apoi identificate folosind lungimi de undă între 230 nm și 320 nm.
Într-un exemplu, sărurile haotrope și alți compuși organici au fost detectate la o absorbanță de 230 nm. Detectează și verifică simultan turbiditatea probelor de ADN la absorbanță la 320 nm.
Evitați supraîncărcarea plăcilor și produselor PCR
Deși este de dorit să rulați mai multe produse în același timp, aceasta poate duce la contaminarea încrucișată a plăcilor PCR.
Supraîncărcarea plăcilor PCR cu diferite produse este o risipă și face dificilă identificarea probelor.
Păstrați înregistrări ale alicotelor de reactivi PCR
Ciclurile continue de înghețare/dezghețare și utilizarea frecventă a alicotelor pot deteriora reactivii PCR, enzimele și DNTP-urile prin recristalizare.
Încercați întotdeauna să monitorizați rata alicotelor utilizate atunci când pregătiți probe pentru analiză.
LIMS preferat este mai potrivit pentru controlul stocurilor și cantităților de reactivi și probe care urmează să fie congelate sau dezghețate.
Alegeți temperatura optimă de recoacere.
Alegerea și utilizarea unei temperaturi de recoacere greșite este un alt mod în care rezultatele PCR conțin erori.
Uneori răspunsul nu merge conform planului. Temperatura de recoacere trebuie scăzută pentru a promova o reacție de succes.
Cu toate acestea, scăderea temperaturii crește șansa de fals pozitive și de amors-dimeri.
Când se utilizează plăci PCR, este important să se confirme analiza curbei de topire, deoarece este un bun indicator pentru alegerea temperaturii corecte de recoacere.
Software-ul de proiectare a amorsei ajută la proiectare, oferind temperatura corectă de recoacere, reducând direct erorile din plăcile PCR.
placa pcr
