Există adesea probleme de un fel sau altul în procesul de cultură celulară. Nu subestimați cultura celulară, dar conține întrebări universitare. Prin comunicarea cu utilizatorii, veți găsi multe probleme care pot fi evitate. Următoarele sunt frecvente în procesul de cultură celulară. Analizați cauza anormalității.
vas Petri
1. Celulele cultivate nu aderă de perete
motiv posibil
1. Digestia excesivă a tripsinei;
2. Contaminarea cu micoplasme;
3. Valoarea pH-ului mediului este prea alcalină (descompunere NaHCO3);
4. Îmbătrânirea celulară;
5. Concentrația inițială a celulelor inoculate este prea mică sau prea mare.
Soluţie
1. Scurtați timpul de digestie a tripsinei sau reduceți concentrația de tripsină;
2. Izolați cultura și detectați micoplasma. Curățați suportul sau incubatorul. Dacă se constată contaminarea cu micoplasmă, aruncați cultura;
3. Utilizați soluție sterilă de acid acetic pentru a regla pH-ul sau umpleți cu CO2 steril;
4. Activați noi celule de conservare;
5. Ajustați concentrația optimă de celule inoculate.
2. Agruparea celulelor în suspensie
motiv posibil
1. Mediul de cultură conține ioni de calciu și magneziu;
2. Contaminarea cu micoplasme;
3. Supradigestia prin protează determină liza celulară;
4. Contaminarea ADN-ului.
Soluţie
1. Spălați celulele cu soluție echilibrată de sare fără calciu și magneziu și suflați ușor și sugeți
2. Celulele obțin o singură suspensie celulară;
3. Separați cultura și detectați micoplasma;
4. Tratamentul celulelor cu ADNazel.
3. Celulele cultivate cresc încet
motiv posibil
1. Datorită înlocuirii diferitelor medii de cultură sau ser;
2. Unele componente necesare creșterii celulare în mediul de cultură, cum ar fi glutamina sau factorii de creștere, sunt epuizate sau lipsite sau au fost distruse;
3. Există o cantitate mică de contaminare bacteriană sau fungică în cultură;
4. Depozitarea necorespunzătoare a reactivilor;
5. Concentrația inițială a celulelor inoculate este prea mică;
6. Celulele au îmbătrânit;
7. Contaminarea cu micoplasme.
Soluţie
1. Comparați compoziția noului mediu și a mediului original, comparați noul ser și vechiul ser pentru a sprijini experimentele de creștere celulară și lăsați celulele să se adapteze treptat la noul mediu;
2. Schimbați în mediu de cultură proaspăt preparat sau adăugați glutamina și factori de creștere;
3. Folosiți mediu de cultură fără antibiotice pentru cultură, dacă se constată că este contaminat, aruncați cultura;
4. Serul trebuie păstrat la -10 până la -20 grade . Mediul de cultură trebuie păstrat la 2-8 grade în întuneric. Mediul de cultură complet care conține ser trebuie păstrat la grade 2-8 și trebuie consumat în decurs de 1 săptămână;
5. Creșteți concentrația inițială a celulelor inoculate;
6. Schimbați la o nouă celulă de conservare;
7. Izolați cultura și detectați micoplasma. Curățați suportul și incubatorul. Dacă se constată contaminarea cu micoplasmă, aruncați cultura.
În al patrulea rând, celulele cultivate cresc slab
motiv posibil
A. Starea celulei în sine
1. Numărul de pasaje celulare este mare, iar celulele îmbătrânesc;
2. Cantitatea de inoculare celulară: cantitate prea mică de inoculare, creșterea lentă a celulelor;
3. Trecerea celulelor este prea târziu: otrăvirea celulelor, care afectează creșterea celulelor după trecere;
4. Timpul de digestie a tripsinei este prea mare sau prea scurt: daca timpul este prea mare, celulele mor; dacă timpul este prea scurt, celulele nu sunt complet separate în grupuri, iar celulele mor;
5. Crioconservarea și recuperarea celulelor: congelare lentă și liză instantanee.
B. Poluarea
1. Contaminarea cu micoplasme;
2. Contaminarea mucegaiului.
C, mediu de cultură sau ser
1. Nicio validare înainte de înlocuirea serului sau a mediului;
2. Dacă mediul selectat este potrivit;
3. Dacă preparatul mediu este adecvat;
4. Dacă preparatul mediu este exact.
D. a cultiva mediul
1. Este normală furnizarea de CO2?
2. Temperatura incubatorului sau agitatorului este controlată corespunzător.
Soluţie
Conform celor patru motive posibile de mai sus, faceți soluții direcționate
1. Acordați atenție stării celulelor: precum numărul de treceri, cantitatea de inoculare etc.;
2. Evitați poluarea (utilizați ser obișnuit, legal și urmăribil);
3. Utilizați ser sau mediu adecvat, de preferință verificat;
4. Acordați atenție mediului de laborator.
Cauze posibile ale morții celulare în cultură
1. Nu există CO2 în incubator;
2. Temperatura din incubator fluctuează prea mult;
3. Celulele sunt deteriorate în timpul crioconservării sau recuperării;
4. Presiunea osmotică a mediului de cultură este incorectă;
5. Acumularea metaboliților toxici în mediul de cultură.
Soluţie
1. Detectează CO2 în incubator;
2. Verificați temperatura în incubator;
3. Luați o nouă specie de celule conservate;
4. Detectează presiunea osmotică a mediului de cultură;
5. Schimbarea în mediu de cultură proaspăt;
