Modalități de a evita contaminarea celulară: sfaturi de pipetare pe care trebuie să le cunoașteți
Dintre numeroasele variabile care sunt controlate în cultura celulară, o variabilă specifică afectează întregul experiment: contaminarea. Un factor care contribuie la contaminarea celulară nu este întotdeauna pe radar și, deși poate afecta în tăcere sănătatea celulelor și poate afecta datele de măsurare, este contaminarea pipetată.
Alegerea pipetelor, vârfurilor de pipetă și a programelor de pipetare primește puțină atenție la proiectarea experimentelor. Chiar și o soluție de tip pătură (autoclavare) pentru a evita contaminarea prin pipetare poate să nu fie atât de eficientă pe cât se crede în mod obișnuit.
Prima regulă a culturii celulare: evitați contaminarea. De ce este tehnica sterilă atât de importantă pentru cultura celulară de succes?
Tehnica aseptică este singura modalitate de a obține rezultate fiabile și reproductibile. Poluarea poate afecta creșterea celulelor, metabolismul și sănătatea -- lucru pe care oamenii de știință sunt interesați să îl studieze. Liniile celulare contaminate nu au proprietățile dorite și funcționează diferit de fiecare dată, în funcție de severitatea contaminării. De asemenea, dacă contaminanții cresc peste celulele dvs. de interes, puteți ajunge să studiați organismul greșit.
Ce tipuri de poluanți se întâlnesc adesea oamenii de știință?
Sursele comune de contaminare sunt bacteriile, drojdia și mucegaiul. În munca de cultură celulară, cel mai greu de detectat și de eradicat este micoplasma. Tipuri mai puțin obișnuite de contaminare includ, de exemplu, materialele din plastic în materialele consumabile de laborator.
Care sunt cauzele comune ale contaminării celulare?
O sursă comună de contaminare este pipetarea slabă, cum ar fi utilizarea pipetelor contaminate și a vârfurilor fără filtru. În plus, lipsa bunelor practici de laborator, cum ar fi decontaminarea inadecvată a instrumentelor precum incubatoare sau dulapuri cu flux laminar, este, de asemenea, o problemă. Pentru a elimina micoplasma, este necesară filtrarea folosind un filtru 0.1 µm în loc de un filtru 0.2 µm.
Trei contaminari de pipetare:
1. Contaminarea pipetă la probă: pipeta sau vârful pipetei contaminează proba.
Cum să evitați:
Utilizați vârfuri de filtru sterile pentru a preveni contaminarea corpului pipetei.
Schimbați vârful pipetei după fiecare probă.
Autoclavați sau sterilizați pipetele în mod regulat cu etanol. Alegeți o pipetă compatibilă cu autoclave.
2. Contaminarea de la probă la pipetă: Pipettarea probei în corpul pipetei contaminează pipeta.
Cum să evitați:
Utilizați vârfuri cu filtru sau vârfuri cu deplasare pozitivă pentru a preveni intrarea probelor în corpul pipetei.
Când pipetați, mențineți pipeta în poziție verticală. Păstrați pipeta în poziție verticală.
Înclinați sticla când pipetați.
Eliberați butonul încet pentru a evita stropirea probei în pipetă. Alegeți o pipetă echipată cu funcție de ejectare moale.
3. Contaminarea între probe: Probele reziduale de pipetare sunt transferate la următoarea probă. De obicei, apare atunci când același vârf este folosit de mai multe ori.
Cum să evitați:
Schimbați vârful pipetei după fiecare probă.
Utilizați vârfuri de filtru sau vârfuri cu deplasare pozitivă pentru a preveni intrarea probei în corpul pipetei și la următoarea probă.
Asigurați-vă că vârful pipetei este sigilat pe pipetă pentru a evita scurgerea probei. De exemplu, vârful Yongyue Medical.
Există factori de contaminare de care oamenii de știință nici măcar nu sunt conștienți?
Eficiența autoclavării nu este adesea verificată, iar dacă autoclavul nu funcționează corect, vârfurile pipetei autoclavate pot să nu fie sterile. Filtrele presterilizate învelite în ambalaje de protecție sunt cea mai sigură opțiune pentru a preveni astfel de accidente. Procesul de presterilizare pentru vârfuri de pipetă de înaltă calitate este validat în mod regulat pentru a asigura eficiența presterilizării.
Cum instrumentele de pipetare și distribuire le facilitează oamenilor de știință manipularea probelor într-un mediu steril?
Alegerea pipetelor și vârfurilor potrivite poate facilita fluxul de lucru aseptic. Pipetele medicale Yongyue sunt ușor de curățat și deschis fără unelte, accelerând curățarea zilnică. Deoarece autoclavarea este mai eficientă în îndepărtarea contaminării decât șervețelele cu etanol, pipetele mecanice Sartorius sunt complet autoclavabile, ceea ce înseamnă că vă puteți decontamina pipetele în mod fiabil. Evacuarea vârfului moale previne riscul potențial de contaminare de la stropire atunci când vârful este scos. Vârfurile de filtru presterilizate vă protejează probele de contaminarea încrucișată. Tipurile medicale Yongyue sunt, de asemenea, ambalate în ambalaje etanșe, ceea ce înseamnă că orice contaminare în condiții de depozitare și livrare nu va intra în contact cu vârfurile sau cutia de vârfuri.
Cum pot oamenii de știință să evite poluarea? Care sunt sfaturile tale de top pentru munca sterilă?
În primul rând, o bună practică de laborator și o planificare atentă a etapelor de lucru. Asigurați-vă că păstrați doar ceea ce este necesar pentru un anumit flux de lucru în dulapul cu flux laminar și utilizați o singură cultură de celule în același timp. În plus, testarea regulată pentru contaminanți precum micoplasma vă oferă liniște sufletească și încredere în rezultatele dvs. Când lucrați în condiții sterile, banii cheltuiți pe vârfuri de filtru presterilizate și reactivi sterili merită banii.
