Mediul de cultură celulară este baza nutritivă pentru imitarea artificială a mediului de creștere in vivo al celulelor animale și pentru menținerea supraviețuirii și proliferării celulelor in vitro. un nutrient. Deci, care sunt problemele comune întâlnite în utilizarea mediului de cultură celulară? Hai sa facem o analiza.
1. Selectarea sistemului tampon și modificarea pH-ului mediului de cultură celulară
Deoarece pH-ul optim pentru majoritatea celulelor este între 7.0 și 7,4, abaterile de la acest interval pot avea efecte dăunătoare asupra creșterii celulelor. Cu toate acestea, cerințele de pH ale diferitelor celule nu sunt exact aceleași. Celulele de cultură primară au, în general, o toleranță slabă la fluctuațiile pH-ului, în timp ce liniile de celule infinite au o toleranță puternică. Prin urmare, în cultura primară, sistemul tampon din mediul de cultură este mai important. Mediul general de cultură celulară utilizează un sistem de sare echilibrat, dar medii de cultură diferite sau aceeași serie de medii de cultură utilizează sisteme de sare echilibrate diferite. De exemplu, seria 199 și seria MEM au toate mediul de cultură de sistem al lui Hanks și cultura de sistem a lui Earle. baza. Unele medii nu sunt sistemul de sare echilibrat convențional menționat mai sus, cum ar fi mediu RPMI1640, mediu F12. Sistemul de sare echilibrat al mediului cu ser scăzut MEM nu este, de asemenea, un sistem de sare echilibrat convențional, iar capacitatea de tamponare a sistemului de sare echilibrat este mai puternică decât cea a sistemului de sare echilibrat convențional.
cultură de celule
Există multe motive pentru scăderea pH-ului în timpul culturii celulare. Când celulele cresc foarte repede, valoarea pH-ului scade de obicei rapid, ceea ce poate fi rezolvat prin trecere în timp util, creșterea raportului de trecere sau reducerea volumului serului. În plus, strângerea excesivă a capacului sticlei de cultură, capacitatea de tamponare insuficientă a sistemului tampon de NaHCO3, concentrația incorectă de sare în mediul de cultură, contaminarea bacteriană, cu drojdie sau fungică pot determina, de asemenea, scăderea rapidă a pH-ului. În acest moment, îl puteți rezolva în următoarele moduri:
1) Creșteți concentrația de NaHCO3 în mediul de cultură sau reduceți concentrația de CO2 în incubator. Când conținutul de NaHCO3 este între 2,0 g/L și 3,7 g/L, concentrația corespunzătoare de CO2 este de 5~10 la sută;
2) Treceți la un mediu de cultură independent de CO2-;
3) Slăbiți corespunzător capacul sticlei. Adăugați tampon HEPES în mediul de cultură pentru a obține concentrația finală 10-25 mM;
4) Utilizați soluția de cultură pe bază de sare Earle în mediul de cultură CO2 și utilizați soluția de cultură preparată de sarea lui Hanks în mediul de cultură atmosferic;
5) Aruncați cultura sau sterilizați cu antibiotice dacă contaminarea este cauza.
2. Mai mulți aditivi importanți sunt utilizați în mod obișnuit în mediile de cultură celulară și probleme cărora ar trebui să se acorde atenție în procesul de utilizare
Roșu de fenol este folosit ca indicator al pH-ului în mediile de cultură celulară. În general, valoarea pH-ului mediului poate fi judecată după efectul indicator al roșului fenolului, dar conținutul de roșu fenol în mediul de cultură celulară cu ser scăzut sau fără ser este diferit de cel din mediul de cultură celulară obișnuit și nu poate fi observat. cu ochiul liber sau Valoarea pH-ului este determinată empiric și se recomandă utilizarea unui pH-metru pentru măsurare. Roșul fenol nu are de obicei un efect semnificativ asupra calității produselor biologice produse în mediile de cultură celulară care conțin ser și poate fi, de asemenea, îndepărtat prin tehnici de purificare, dar roșul fenolului poate provoca dezechilibru intracelular de sodiu/potasiu în mediile de cultură celulară fără ser. , afectând creșterea celulelor.
placă de cultură celulară
Bicarbonatul de sodiu este utilizat în principal ca sistem tampon în mediul de cultură celulară și are, de asemenea, efectul de reglare a presiunii osmotice. De obicei, cantitatea recomandată de bicarbonat de sodiu în instrucțiunile de utilizare a produsului este o cantitate standard și sigură, care se obține pe baza experienței practice pe baze științifice. Cu toate acestea, din cauza diferitelor linii celulare (tulpini), aceeași celulă se poate adapta la diferite medii (toleranță celulară diferită etc.), și există diferențe regionale în calitatea apei etc., care pot fi, de asemenea, ușor modificate în producția reală. proces, dar utilizarea celor care trebuie să facă testele corespunzătoare (testele fizico-chimice și de producție celulară etc.).
HEPES este un tampon neionic cu o bună capacitate de tamponare în intervalul de pH de la 7,2 la 7,4 și poate fi toxic pentru unele celule la concentrații mari. Tamponul HEPES poate fi utilizat cu niveluri scăzute de carbonat de sodiu (0.34g/L) pentru a compensa creșterea presiunii osmotice cauzată de adăugarea de HEPES suplimentar. Intervalul său de concentrație sigur este de 10 ~ 25 mmol/L.
Piruvatul de sodiu poate fi folosit ca sursă alternativă de carbon în cultura celulară și, deși celulele preferă glucoza ca sursă de carbon, celulele pot metaboliza și piruvatul de sodiu în absența glucozei.
Glutamina este foarte instabilă în soluție. Poate fi descompus la 50% la 4 grade timp de 1 săptămână. Cel mai bine este să îl pregătiți separat în timpul utilizării, să îl păstrați într-un frigider de -20 grade și să îl adăugați în mediul de cultură celulară înainte de utilizare.
