Mediul de cultură celulară trebuie să conțină suficienți nutrienți pentru a satisface substanțele și energia necesare reacțiilor biochimice, cum ar fi sinteza celulelor noi și metabolismul celular. Componentele principale ale mediului de cultură celulară sunt apa, aminoacizii, vitaminele, carbohidrații, sărurile anorganice și alți nutrienți auxiliari. Prin urmare, trebuie să acordăm atenție metodei de sterilizare a mediului de cultură celulară și precauțiilor aferente în experimentele zilnice.
cultură de celule
1. Metode și precauții de sterilizare pentru diferite medii de cultură celulară
Metodele de sterilizare a mediului de cultură celulară sunt împărțite în sterilizare în autoclavă și sterilizare prin filtrare pe membrană. Medii de cultură diferite pot avea metode de sterilizare diferite datorită nutrienților diferiți.
Autoclavă
Unele medii, cum ar fi MEM, pot fi autoclavate, aceste medii în general nu conțin L-glutamina și bicarbonat de sodiu și sunt în general adăugate după ce mediul a fost autoclavat. În plus, glutamatul de înaltă presiune (cum ar fi L-alanil-L-glutamina) poate fi utilizat în locul L-glutaminei. Mediul autoclavabil este complet sterilizat cu pierderi minime de nutrienți la 121 de grade, 15 psi și 15 minute, fără a prelungi timpul de sterilizare.
Majoritatea mediilor de cultură celulară nu sunt potrivite pentru autoclavare. Deoarece mediul de cultură conține adesea vitamine, proteine, polipeptide, factori de creștere și alte substanțe, aceste substanțe sunt predispuse la denaturare sau pierderea funcției la temperaturi ridicate sau la expunere la radiații, astfel încât lichidele menționate mai sus sunt în mare parte filtrate și sterilizate pentru a elimina bacteriile. Există multe membrane de filtrare disponibile pentru filtrare și sterilizare, iar materialele lor sunt în principal PES, nailon, policarbonat, acetat de celuloză, nitroceluloză, PTFE, ceramică etc. Sterilizarea prin filtrare cu membrană este o metodă frecvent utilizată și convenabilă în prezent. Se folosesc adesea membrane filtrante cu dimensiunea porilor de 0.2 μm, iar unele folosesc dimensiunea porilor de 0.1 μm. În comparație cu filtrarea la presiune înaltă, membranele au o durată de viață și sunt mai scumpe, dar sunt mai puțin distructive pentru nutrienții din mediul de cultură celulară.
2. Precauții în timpul depozitării diferitelor medii de cultură celulară
În general, mediul lichid de cultură celulară nu trebuie înghețat la -20 grade , deoarece nutrienții pot fi precipitați în timpul decongelarii, ceea ce va afecta efectul culturii. În circumstanțe normale, ar trebui să fie depozitat la 2 ~ 8 grade ferit de lumină. Înainte de utilizare, scoateți-l din frigider și puneți-l la temperatura camerei pentru echilibrare. Mediul lichid obișnuit este valabil timp de 6 până la 12 luni. Încercați să evitați depozitarea pe termen lung a mediului lichid de cultură celulară. Glutamina din ea se va descompune lent odată cu prelungirea timpului de depozitare. Dacă creșterea celulelor nu este bună, puteți lua în considerare testarea conținutului de glutamină din mediu pentru a determina dacă să adăugați glutamină. . Mediul de cultură celulară lichid disponibil comercial are o dată de expirare specifică. După utilizarea mediului de cultură celulară cu pulbere uscată pentru a prepara lichidul, acesta trebuie păstrat și la temperatură scăzută (2 ~ 8 grade). Pe lângă degradarea ușoară a glutaminei în mediu, alte componente din mediu pot fi, de asemenea, degradate sau precipitate odată cu creșterea temperaturii.
